Método para a lipofuscina

O método para a lipofuscina é unha técnica para a demostración deste pigmento, creado polo AFIP (Instituto de patoloxía das Forzas Armadas dos Estados Unidos).

A lipofuscina é un pigmento marrón dourado formado nos lisosomas de células que sofren auto oxidación progresiva e prolongada de lípidos insaturados. Este pigmento tende a se acumular nas células (nos lisosomas, coma un pigmento en gran de café claro, localizado preto do polo nuclear da célula) cun metabolismo elevado, coma neuronas, epitelio tiroide e tecido muscular, particularmente cardíaco, e aparece sobre todo co avellentamento en casos de deficiencia de vitamina D. Está composto de lipoproteínas, e a súa acumulación nun tecido denomínase lipofucsinosis ou atrofia parda.

Tecido control e diana

Os órganos mais afectados son: corazón, fígado e sistema nervioso. O fixador tisular óptimo é o formol 10%, o medio de inclusión preferible é a parafina, e o grosor de corte ideal é de 6 micrómetros.

Reactivos

1. Solución de Carbolfuscina de Kinyoun (filtrar antes de usar):
   1. 4gr Fucsina básica
   2. 8gr Fenol (ácido carbólico) en cristais derretidos
   3. 20cc Alcohol etílico ó 95%
   4. 100cc Auga destilada
2. Solución alcohólica ácida ó 1%:
   1. 1cc Ácido Clorhídrico
   2. 99cc Etanol ó 70%
3. Solución acuosa de ácido pícrico:
   1. 2gr Ácido pícrico
   2. 100cc Auga destilada

Procedemento

1. desparafinar e hidratar as láminas até chegar á auga destilada.
2. colorear coa solución de carbolfuscina durante unha hora.
3. enxaugar con auga destilada, varias veces.
4. diferenciar coa solución de alcohol ácido, mergullando as láminas de 5 a 6 veces, ou até que as seccións tornen dunha cor rosada pálida.
5. lavar con auga corrente durante 5 minutos e logo enxaugar con auga destilada.
6. contrastar coa solución de ácido pícrico por 1 minuto aproximadamente.
7. deshidratar e aclarar co alcohol etílico ó 95 %, alcohol etílico absoluto e xileno, 2 veces cada un, 2 minutos cada un.

Resultados

• Lipofuscina: vermello.
• Fondo: amarelo.

Os pigmentos amosan unha cor parda fluorescente na luz ultravioleta.

Véxase tamén

Bibliografía

• ARP, ed. (1992). Métodos Histotecnolóxicos. Instituto de patoloxía das Forzas Armadas dos EUA (AFIP). 

Ligazóns externas

• Pigmentos de lipofuscina nos nenos