Morfolino: Diferenzas entre revisións
Contido eliminado Contido engadido
Sen resumo de edición |
Recuperando 1 fontes e etiquetando 0 como mortas. #IABot (v2.0beta9) |
||
Liña 43:
Para que un Morfolino sexa efectivo debe penetrar na célula atravesando a membrana celular. Unha vez que están no [[citosol]], os Morfolinos difunden libremente entre o citosol e o [[núcleo celular|núcleo]], como se demostra pola actividade de modificación do [[splicing]] exhibida polos Morfolinos observada despois da microinxección no citosol das células. Úsanse diferentes métodos para introducilos en embrións, células cultivadas ou en animais adultos. Para a súa introdución en embrións úsase un aparello de [[microinxección]], e as inxeccións realízanse normalmente na fase embrionaria dunha célula ou de poucas células;<ref>{{Cita publicación periódica | last =Rosen | first = JN | autor2= Sweeny MF, Mably JD | year = 2009 | title = Microinjection of zebrafish embryos to analyze gene function. | journal = J Vis Exp. | volume = 9| issue = 25 | url = http://www.jove.com/index/details.stp?ID=1115 | doi = 10.3791/1115 | pmid =19274045}}</ref> un método alternativo para a súa introdución en embrións é a [[electroporación]] (descargas eléctricas que crean poros na membrana), que pode facilitar a entrada dos oligos nos tecidos de fases embrionarias posteriores.<ref>{{Cita publicación periódica | last = Cerda | first = GA | autor2= Thomas JE, Allende ML, Karlstrom RO, Palma V | year = 2006 | title = Electroporation of DNA, RNA, and morpholinos into zebrafish embryos. | journal = Methods | volume = 39| issue = 3 | pages = 207–11 |pmid=16837210 | doi = 10.1016/j.ymeth.2005.12.009}}</ref> Técnicas comúns para a introdución en células cultivadas son o uso do péptido Endo-Porter (que fai que o Morfolino sexa liberado dos [[endosoma]]s),<ref name="Summerton" /> o "Sistema Especial" de introdución (que usa un [[heterodúplex]] Morfolino-ADN e un axente de penetración [[polietilenimina]] etoxilado),<ref name="Morcos" /> a electroporación,<ref>{{Cita publicación periódica | last = Jubin | first = R | year = 2004 | title = Optimizing electroporation conditions for intracellular delivery of morpholino antisense oligonucleotides directed against the hepatitis C virus internal ribosome entry site. | journal = Methods Mol Med. | volume = 106| pages = 309–22 |pmid=15375324}}</ref> ou o ''scrape loading'' (carga por raspado).<ref>{{Cita publicación periódica | last = Partridge | first = M | autor2= Vincent A, Matthews P, Puma J, Stein D, Summerton J | year = 1996 | title = A simple method for delivering morpholino antisense oligos into the cytoplasm of cells. | journal = Antisense Nucleic Acid Drug Dev. | volume = 6| issue = 3 | pages = 169–75 |pmid=8915501}}</ref>
A introdución en tecidos adultos normalmente é difícil, aínda que hai algúns sistemas que permiten a absorción de oligos Morfolino non modificados (entre os que se inclúen as células musculares, xa de seu moi permeables, características da [[distrofia muscular de Duchenne]]<ref>{{Cita publicación periódica | last = Fletcher | first = S | autor2= Honeyman K, Fall AM, Harding PL, Johnsen RD, Wilton SD | year = 2006 | title = Dystrophin expression in the mdx mouse after localised and systemic administration of a morpholino antisense oligonucleotide. | journal = J Gene Med. | volume = 8| issue = 2 | pages = 207–16 |pmid=16285002 | doi = 10.1002/jgm.838}}</ref> ou as células do [[endotelio|endotelio vascular]] estresadas durante unha [[anxioplastia]]<ref>{{Cita publicación periódica | last = Kipshidze | first = NN | autor2= Kim HS, Iversen P, Yazdi HA, Bhargava B, New G, Mehran R, Tio F, Haudenschild C, Dangas G, Stone GW, Iyer S, Roubin GS, Leon MB, Moses JW | year = 2002 | title = Intramural coronary delivery of advanced antisense oligonucleotides reduces neointimal formation in the porcine stent restenosis model. | journal = J Am Coll Cardiol. | volume = 39| issue = 10 | pages = 1686–91 |pmid=12020498 | doi = 10.1016/S0735-1097(02)01830-2}}</ref>). Aínda que son permeables aos líquidos intercelulares, os PMOs (Morfolinos) non conxugados distribúense de forma bastante limitada no citosol e núcleo nos tecidos sans cando son administrados por vía IV. A administración sistémica en moitas células nos organismos adultos pode realizarse usando conxugados [[covalente]]s dos oligos Morfolino, que levan [[péptidos penetradores da célula]] unidos, e, aínda que foi asociada toxicidade co uso de doses moderadas de conxugados de péptidos,<ref>{{Cita publicación periódica | last = Abes | first = S | autor2= Moulton HM, Clair P, Prevot P, Youngblood DS, Wu RP, Iversen PL, Lebleu B | year = 2006 | title = Vectorization of morpholino oligomers by the (R-Ahx-R)(4) peptide allows efficient splicing correction in the absence of endosomolytic agents. | journal = J Control Release | volume = 116| issue = 3 | pages = 304–13 |pmid=17097177 | doi = 10.1016/j.jconrel.2006.09.011}}</ref><ref>{{Cita publicación periódica | last = Burrer | first = R | autor2= Neuman BW, Ting JPC, Stein DA, Moulton HM, Iversen PL, Kuhn P, Buchmeier MJ | year = 2007 | title = Antiviral effects of antisense morpholino oligomers in murine coronavirus infection models. | journal = J. Virol. | volume = 81| issue = 11 | pages = 5637–48 | doi = 10.1128/JVI.02360-06 | pmid = 17344287 | pmc = 1900280}}</ref> foron utilizados con efectividade ''in vivo'' para a introdución de oligos en doses inferiores ás que causan toxicidade.<ref name="Deas" /><ref>{{Cita publicación periódica | last = Amantana | first = A | autor2= Moulton HM, Cate ML, Reddy MT, Whitehead T, Hassinger JN, Youngblood DS, Iversen PL | year = 2007 | title = Pharmacokinetics, Biodistribution, Stability and Toxicity of a Cell-Penetrating Peptide-Morpholino Oligomer Conjugate. | journal = Bioconjug Chem | volume = 18 | pages = 1325 |pmid=17583927 | doi = 10.1021/bc070060v | issue = 4}}</ref> Un dendrímero octa-[[guanidina|guanidinio]] unido ao extremo dun Morfolino pode facer penetrar o oligo modificado (chamado Vivo-Morfolino) desde o [[sangue]] ao citosol celular.<ref>{{Cita publicación periódica | last = Li | first = YF | autor2= Morcos PA | year = 2008 | title = Design and Synthesis of Dendritic Molecular Transporter that Achieves Efficient in Vivo Delivery of Morpholino Antisense Oligo. | journal = Bioconjug Chem | volume = 19| issue = 7 | pages = 1464–70 |pmid=18564870 | doi = 10.1021/bc8001437}}</ref><ref>{{Cita publicación periódica | last = Morcos | first = PA
== Notas ==
| |||