Revisión como estaba o 11 de decembro de 2015 ás 21:17 editar Miguelferig (conversa \| contribucións) 242.727 edicións Sen resumo de edición ← Edición máis vella		Revisión como estaba o 11 de decembro de 2015 ás 21:56 editar desfacer Miguelferig (conversa \| contribucións) 242.727 edicións →‎Principios Edición máis nova →
Liña 16: == Principios == <!-- Como o ELISA é un ensaio bioquímico, implica a detección dun "analito" (é dicir, a substancia específica cuxa presenza se quere analizar cuantitativa ou cualitativamente) nunha mostra líquida por un método que usa reactivos líquidosa durante a "análise" (é dicir, unha secuencia controlada de reaccións bioquímicas que xerar un sinal que pode ser cuantificado doadaemnte e interpretado como unha medida da cantidade de analito na mostra) que permanece en estado líquido e dentro da cámara de reacción ou pozo necesario para conter os reactivos. Oponse a un método de "laboratorio seco" (''dry lab''), o cal pode usar tiras secas, e mesmo se a mostra é líquida (por exemplo, unha pequena pinga medida), o paso final de detección na análise "seca" implica a lectura dos resultados nunha tira seca por métodos como a [[reflectometría]] e non necesita unha cámara para conter a reacción para impedir que se verta ou se mesturen as mostras. As an analytic biochemistry assay, ELISA involves detection of an "analyte" (i.e. the specific substance whose presence is being quantitatively or qualitatively analyzed) in a liquid sample by a method that continues to use liquid reagents during the "analysis" (i.e. controlled sequence of biochemical reactions that will generate a signal which can be easily quantified and interpreted as a measure of the amount of analyte in the sample) that stays liquid and remains inside a reaction chamber or well needed to keep the reactants contained; It is opposed to "dry lab" that can use dry strips – and even if the sample is liquid (e.g. a measured small drop), the final detection step in "dry" analysis involves reading of a dried strip by methods such as [[reflectometry]] and does not need a reaction containment chamber to prevent spillover or mixing between samples. Como o ELISA é un ensaio heteroxéneo, separa algún compoñente da mestura de reacción analítica ao adsorber certos compoñentes sobre unha fase sólida que é inmobilizada fisicamente. No ELISA, engádese unha mostra líquida sobre a fase estacionaria sólida con propiedades de unión especiais e é seguido pola adición secuencial de moitos reactivos líquidos, que son incubados e lavados producindo algún cambio óptico (por exemplo, unha reacción encimática orixina unha cor) no líquido final do pozo ded reacción no cal se mide a cantidade de analito. A "lectura" cualitativa está xeralmente baseada na detección da intensidade de luz transmitida por [[espectrofotometría]], o cal implica a cuantitación da transmisión dalgunha [[lonxitude de onda]] de luz específica (e tamén do fondo transparente do pozo da amplificación do sinal no formato de placa de pozos múltiples). A sensibilidade da detección dep0ende da amplificación do sinal durante as reaccións analíticas. Dado que as reaccións encimáticas so procesos de amplificación ben coñecidos, o sinal xérano encimas que están ligados a axentes reactivos en proporcións fixadas para permitir unha cuantificación precisa, de onde vén o nome de "ligado a encima" do proceso. As a heterogenous assay, ELISA separates some component of the analytical reaction mixture by adsorbing certain components onto a solid phase which is physically immobilized. In ELISA, a liquid sample is added onto a stationary solid phase with special binding properties and is followed by multiple liquid reagents that are sequentially added, incubated and washed followed by some optical change (e.g. color development by the product of an enzymatic reaction) in the final liquid in the well from which the quantity of the analyte is measured. The qualitative "reading" usually based on detection of intensity of transmitted light by [[spectrophotometry]], which involves quantitation of transmission of some specific wavelength of light through the liquid (as well as the transparent bottom of the well in the multiple-well plate format). The sensitivity of detection depends on amplification of the signal during the analytic reactions. Since enzyme reactions are very well known amplification processes, the signal is generated by enzymes which are linked to the detection reagents in fixed proportions to allow accurate quantification – thus the name "enzyme linked". O analito tamén se chama [[ligando]] porque se une ou liga especificamente a un reactivo de detección, polo que o ELISA entra dentro da categoría máis ampla dos [[ensaios de unión de ligandos]]. O reactivo de unión específico de ligando é "inmobilizado", é dicir, normalmente cuberto e secado no fondo transparente e ás veces tamén na parede lateral do pozo (a "fase sólida"/"substrato sólido" estacionaria aquí oponse a micopartículas sólidas/esferas que poden ser retiradas polo lavado), o cal normalmente é construído como9 unha placa de pozos múltiples coñecida como "placa de ELISA". Convencionalmente, igual que noutras formas de [[inmunoensaio]]s, utilízase a especificidade da reacción de tipo [[antíxeno]]-[[anticorpo]] porque é doado utilizar como reactivo un anticorpo especificamente contra un antíxeno en masa. Alternativamente, se o propio analito é un anticorpo, pode utilizarse o seu antíxeno diana como o reactivo de unión. The analyte is also called the ligand because it will specifically bind or ligate to a detection reagent, thus ELISA falls under the bigger category of [[ligand binding assays]]. The ligand-specific binding reagent is "immobilized", i.e., usually coated and dried onto the transparent bottom and sometimes also side wall of a well (the stationary "solid phase'/"solid substrate" here as opposed to solid microparticle/beads that can be washed away), which is usually constructed as a multiple-well plate known as the "ELISA plate". Conventionally, like other forms of [[immunoassay]]s, the specificity of [[antigen]]-[[antibody]] type reaction is used because it is easy to raise an antibody specifically against an antigen in bulk as a reagent. Alternatively, if the analyte itself is an antibody, its target antigen can be used as the binding reagent. == Historia == <!-- Before the development of the ELISA, the only option for conducting an [[immunoassay]] was [[radioimmunoassay]], a technique using [[radioactive]]ly labeled antigens or antibodies. In radioimmunoassay, the radioactivity provides the signal, which indicates whether a specific antigen or antibody is present in the sample. Radioimmunoassay was first described in a scientific paper by [[Rosalyn Sussman Yalow]] and [[Solomon Berson]] published in 1960.<ref>{{cite journal \|last1=Yalow \|first1=Rosalyn S. \|last2=Berson \|first2=Solomon A. \|title=Immunoassay of endogenous plasma insulin in man \|journal=The Journal of Clinical Investigation \|volume=39 \|issue= \|pages=1157–75 \|year=1960 \|pmid=13846364 \|pmc=441860 \|doi=10.1172/JCI104130 }}</ref> Liña 105: * detection of HIV antibodies in blood samples --> == Notas == {{Listaref\|2}}

ELISA: Diferenzas entre revisións