|
Este sistema foi descrito primeiramente en 1989 por Fields e Song utilizando o lévedo ''[[Saccharomyces cerevisiae]]'' como modelo biolóxico.<ref>{{cite journal|last=Terentiev|first=A.A.|coauthors=Moldogazieva, N.T.; Shaitan, K.V.|title=Dynamic proteomics in modeling of the living cell. Protein-protein interactions.|journal=Biochemistry. Biokhimiia|year=2009|volume=74|issue=13|pages=1586–607|pmid=20210711}}</ref> Os dous híbridos de lévedos permiten a identificación por pares de IPPs (método binario) ''in vivo'', indicando tendencias non específicas a reaccións de adhesión.<ref name="pmid23017156|noedit">{{cite pmid|23017156|noedit}}</ref>
As células do lévedo son [[transfección|transfectadas]] con dous [[plásmido]]s: o '''isco''' (proteína que interesa fusionada con dominio de unión ao ADN dun [[factor de transcrición]] de lévedo, como Gal4), e a '''presa''' (unha libraría de fragmentos de [[ADNc]] ligados ao dominio de activación do factor de transcrición. A transcrición de [[xene reporteiro|xenes reporteiros]] non se produce a non ser que o ''isco'' e a ''presa'' interaccionen entre si e formen un factrorfactor de transcrición funcional. Así, a interacción entre proteínas pode inferirse pola presenza dos produtos resultantes da expresión do xene reporteiro.<ref name=Jukka>{{cite journal|last=Westermarck|first=J.|coauthors=Ivaska, J.; Corthals, G.L.|title=Identification of protein interactions involved in cellular signaling.|journal=Molecular & cellular proteomics : MCP|year=2013|volume=12|issue=7|pages=1752–63|pmid=23481661}}</ref><ref name=Wodak>{{cite journal|last=Wodak|first=S.J.|coauthors=Vlasblom, J.; Turinsky, A.L.; Pu, S.|title=Protein-protein interaction networks: the puzzling riches.|journal=Current opinion in structural biology|year=2013|volume=23|issue=6|pages=941–53|pmid=24007795}}</ref>
Malia a súa utilidade, o sistema de dous híbridos de lévedos ten limitacións, como son: a súa especificidade é relativamente baixa; utiliza lévedos como principal sistema hóspede, o cal pode ser un problema cando se estudan outros modelos biolóxicos; o número de IPPs identificadas é xeralmente baixo porque se perden algunhas IPPs transitorias durante os pasos de purificación;<ref>{{cite journal|last=Rajagopala|first=S.V.|coauthors=Sikorski, P.; Caufield, J.H.; Tovchigrechko, A.; Uetz, P.|title=Studying protein complexes by the yeast two-hybrid system.|journal=Methods|year=2012|volume=58|issue=4|pages=392–9|pmid=22841565}}</ref> e, subvalora as [[proteína de membrana|proteínas de membrana]], por exemplo.<ref name=Stelzl>{{cite journal|last=Stelzl|first=U.|coauthors=Wanker, E.E.|title=The value of high quality protein-protein interaction networks for systems biology.|journal=Current opinion in chemical biology|year=2006|volume=10|issue=6|pages=551–8|pmid=17055769}}</ref><ref name=Pets>{{cite journal|last=Petschnigg|first=J.|coauthors=Snider, J.; Stagljar, I.|title=Interactive proteomics research technologies: recent applications and advances.|journal=Current opinion in biotechnology|year=2011|volume=22|issue=1|pages=50–8|pmid=20884196}}</ref> Estas limitacións foron superadas grazas á aparición de variantes do método de dous híbridos de lévedos, como o de '''dous híbridos de lévedos de membrana (MYTH)'''<ref name="Pets" /> e o '''sistema de ubiquitina dividida''' (''split-ubiquitin system''),<ref name="Wodak" /> que non están limitados ás interaccións que ocorren no núcleo, e o '''sistema de dous híbridos bacteriano''', que se realiza en [[bacteria]]s;<ref>{{cite journal|last=Battesti|first=A|coauthors=Bouveret, E|title=The bacterial two-hybrid system based on adenylate cyclase reconstitution in Escherichia coli.|journal=Methods|year=2012|volume=58|issue=4|pages=325–34|pmid=22841567}}</ref>
[[Ficheiro:Principle of Tandem Affinity Purification.svg|miniatura|esquerda|Principios da Purificación de afinidade en tándem.]]
|
