Transformación xenética: Diferenzas entre revisións
Contido eliminado Contido engadido
mSen resumo de edición |
Sen resumo de edición |
||
Liña 4:
==Historia==
{{VT|Experimento de Avery-McLeod-McCarty}}
A transformación foi descuberta en 1928 polo bacteriólogo británico [[Frederick Griffith]]. Griffith estaba traballando co ''[[Streptococcus pneumoniae]]'', bacteria que ten dúas
Pensábase inicialmente que ''[[Escherichia coli]]'', unha bacteria utilizada correntemente como organismo de laboratorio, non podía experimentar transformación. Porén, en 1970, Morton Mandel e Akiko Higa demostraron que ''E. coli'' pode ser inducida a captar ADN do [[fago lambda|bacteriófago λ]] sen ter que utilizar [[fago axudante|fagos axudantes]] despois de ser tratada con solucións de [[cloruro de calcio]]. <ref>{{cite journal|doi = 10.1016/0022-2836(70)90051-3 |title = Calcium-dependent bacteriophage DNA infection | last = Mandel | first = Morton | coauthors = Higa, Akiko | journal = Journal of Molecular Biology | year= 1970 | url = http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/0022283670900513 | volume = 53 |issue = 1 |pages = 159–162|pmid = 4922220 }}</ref> Dous anos despois en 1972, Stanley Cohen, Annie Chang e Leslie Hsu demostraron que o tratamento con CaCl<sub>2</sub> é tamén efectivo para a transformación de ADN de plásmidos. <ref>{{cite journal|doi = 10.1073/pnas.69.8.2110|title = Nonchromosomal Antibiotic Resistance in Bacteria: Genetic Transformation of Escherichia coli by R-Factor DNA | last = Cohen | first = Stanley | authorlink = Stanley Cohen (biochemist) | coauthors = Chang, Annie and Hsu, Leslie | journal = Proceedings of the National Academy of Sciences | year= 1972 | url = http://www.pnas.org/content/69/8/2110.abstract|pmid = 4559594|volume = 69|issue = 8|pages = 2110–4|pmc = 426879}}</ref> O método de transformación de Mandel e Higa foi despois mellorado por [[Douglas Hanahan]]. <ref> Hanahan, D. (1983). "Studies on transformation of Escherichia coli with plasmids". Journal of Molecular Biology 166 (4): 557–580. doi:10.1016/S0022-2836(83)80284-8. PMID 6345791. </ref> O descubrimento da existencia de competencia inducida artificialmente en ''E. coli'' proporcionou un eficiente e útil procedemento para provocar a transformación de bacterias, que permitiu simplificar os métodos de [[clonaxe molecular]] en [[biotecnoloxía]] e [[investigación]], e que se converteu nun procedemento de rutina nos laboratorios.
A transformación utilizando [[electroporación]] desenvolveuse a finais da década de 1980, e incrementou a eficiencia da transformación in vitro e o número de
==Mecanismos==
Liña 16:
====Competencia natural====
Aproximadamente o 1% das especies bacterianas poden captar de forma natural ADN nas condicións de laboratorio, e máis especies poden captalo nos seus ambientes naturais. O [[ADN]] pode transferirse entre diferentes
Debido ás diferenzas de estrutura das envolturas celulares das bacterias [[Gram positiva]]s e [[Gram negativa]]s, hai tamén algunhas diferenzas nos mecanismos da captación do ADN entre estas células, pero a maioría delas comparten características comúns que implican a proteínas relacionadas. O ADN únese primeiro á superficie de células competentes nun receptor do ADN, e pasa a través da membrana plasmática utilizando unha ADN translocase. <ref> Lacks, S.; Greenberg, B.; Neuberger, M. (1974). "Role of a Deoxyribonuclease in the Genetic Transformation of Diplococcus pneumoniae". Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 71 (6): 2305–2309. PMC 388441. PMID 4152205. http://www.pubmedcentral.nih.gov/articlerender.fcgi?tool=pmcentrez&artid=388441.</ref> Só pode atravesar o ADN monocatenario, polo que unha nuclease degrada a outra cadea durante o proceso, e o ADN monocatenario translocado pode despois integrarse no cromosoma bacteriano por medio dun proceso dependente de [[RecA]]. Nas células Gram negativas, debido á presenza dunha membrana extra, o ADN require a presenza de canais formados por [[secretina]]s na membrana externa da súa [[parede celular|parede]]. Poden requirirse [[pilina]]s para que exista competencia, pero non está claro. <ref>Long, C. D.; Tobiason, D. M.; Lazio, M. P.; Kline, K. A.; Seifert, H. S. (2003). "Low-Level Pilin Expression Allows for Substantial DNA Transformation Competence in Neisseria gonorrhoeae". Infection and immunity 71 (11): 6279–6291. PMC 219589. PMID 14573647. http://www.pubmedcentral.nih.gov/articlerender.fcgi?tool=pmcentrez&artid=219589.</ref> A captación do ADN xeralmente non é específico de secuencia, aínda que nalgunahs especies a presenza de secuencias de captación de ADN específicas pode facilitar a captación eficiente do ADN. <ref> Sisco, K. L.; Smith, H. O. (1979). "Sequence-specific DNA uptake in Haemophilus transformation". Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 76 (2): 972–976. PMC 383110. PMID 311478. //www.pubmedcentral.nih.gov/articlerender.fcgi?tool=pmcentrez&artid=383110.</ref>
|