ADN recombinante: Diferenzas entre revisións
Contido eliminado Contido engadido
Sen resumo de edición |
|||
Liña 17:
A clonación molecular é o método de laboratorio usado para crear ADN recombinante.<ref name="isbn0-201-75054-6">{{cite book |author1=Campbell, Neil A. |author2=Reece, Jane B.. |lastauthoramp=yes |title=Biology (6th ed.) |publisher=Addison Wesley |location=San Francisco |year=2002 |pages=375–401 |isbn=978-0-201-75054-6 |oclc= |doi= }}</ref><ref name="isbn0-8153-4111-3">{{cite book |author1=Peter Walter |author2=Alberts, Bruce |author3=Johnson, Alexander S. |author4=Lewis, Julian |author5=Raff, Martin C. |author6=Roberts, Keith |title=Molecular Biology of the Cell (5ª edición, ampliada) |publisher=Garland Science |location=New York |year=2008 |pages= |isbn=978-0-8153-4111-6 |oclc= |doi= }}. A 4ª edición está dispoñible en liña no NCBI Bookshelf: [https://www.ncbi.nlm.nih.gov/bookshelf/br.fcgi?book=mboc4 link]</ref><ref name=isbn1-4292-2936-5>{{cite book |author1=Berg, Jeremy Mark |author2=Tymoczko, John L. |author3=Stryer, Lubert |title=Biochemistry, 7th ed. (Biochemistry (Berg)) |publisher=W.H. Freeman & Company |location= |year=2010 |pages= |isbn=978-1-4292-2936-4 |oclc= |doi= }} A 5ª edición estañ dispoñible en liña no NCBI Bookshelf: [https://www.ncbi.nlm.nih.gov/bookshelf/br.fcgi?book=stryer link]</ref><ref name="isbn0-7167-2866-4">{{cite book |author=Watson, James D. |title=Recombinant DNA: Genes and Genomes: A Short Course |publisher=W.H. Freeman |location=San Francisco |year=2007 |pages= |isbn=978-0-7167-2866-5 |oclc= |doi= }}</ref> É un dos dosu métodos máis amplamente usados, xunto coa [[reacción en cadea da polimerase]] (PCR), usada para dirixir a replicación de calquera secuencia específica de ADN desexada. Hai dúas diferenzas fundamentais entre os dous métidos. Unha é que a clonación molecular implica a replicación do ADN dentro dunha célula viva, mentres que a PCR replica o ADN nun tubo de ensaio, sen células vivas. Outra diferenza é que a clonación implica cortar e pegar secuencias de ADN, mentres que a PCR amplifica copiándoa unha secuencia existente.
A formación do ADN recombinante require un [[Vector (bioloxía molecular)|vector de clonación]], unha molécula de ADN que leve o ADN ao interior da célula viva. Os vectores xeralmente derivan de [[plásmido]]s ou [[virus]] e son segmentos relativamente pequenos de ADN que conteñen os sinais xenéticos necesarios para a replicación, así como elementos adicionais convenientes no ADN alleo inserido, que identifican as células que conteñen o ADN recombinante e, cando é apropiado, expresan o ADN alleo. A elección do vector para unha clonación molecular depende do organismo hóspede utilizado, o tamaño do ADN que vai ser clonado e de se o ADn alleo vai ser expresado e como.<ref name="isbn0-87969-576-5">{{cite book |author1=Russell, David W. |author2=Sambrook, Joseph |title=Molecular cloning: a laboratory manual |publisher=Cold Spring Harbor Laboratory |location=Cold Spring Harbor, N.Y |year=2001 |pages= |isbn=978-0-87969-576-7 |oclc= |doi=
Nos protocolos de clonación estándar, a clonación dun fragmento de ADN implica esencialmente sete pasos: (1) Elección do organismo hóspede e do vector de clonación, (2) Preparación do ADN vector, (3) Preparación do ADN que vai ser clonado, (4) Creación de ADN recombinante, (5) Introdución do ADN recombinante no organismo hóspede, (6) Selección dos organismos que conteñen o ADN recombinante e (7) Cribado buscando os clons co ADN desexado inserido e as súas propiedades biolóxicas.<ref name="isbn0-7167-2866-4" /> (Para máis detalle ver [[clonación molecular]]).
| |||