Diferenzas entre revisións de «EcoRV»

m
Arranxos varios using AWB
m (Bot: Cambio o modelo: Cite journal; cambios estética)
m (Arranxos varios using AWB)
| CDD =
}}
'''EcoRV''' (lido "eco erre cinco"), tamén chamado Eco32I, é un [[encima]] da clase das [[endonuclease de restrición|endonucleases de restrición]] de tipo II que foi illada de certas cepas da bacteria ''[[Escherichia coli]]''. Corta o ADN cando atopa unha determinada secuencia de nucleótidos que recoñece.
 
Este encima de restrición ten un uso frecuente en [[bioloxía molecular]]. Ten a característica que crea no ADN cortado extremos romos (outros encimas de restrición crean [[extremo cohesivos|extremos cohesivos]]). O encima recoñece a secuencia de ADN [[secuencia palindrómica|palindrómica]] de 6 bases 5'-GAT|ATC-3' e fai un corte vertical nela. A secuencia complementaria é, pois, 3'-CTA|TAG-5'. Os extremos romos poden ser ligados a un sitio de clonación tamén romo doadamente, aínda que con menor eficiencia que os extremos cohesivos.
Resolveuse por [[cristalografía de raios X]] a estrutura deste encima, e a de varios mutantes, en complexo co ADN ao que corta.
 
A parte central (''core'') do encima consta dunha [[folla beta|folla β]] mixta de cinco cadeas flanqueada por [[hélice alfa|hélices α]]. Esta parte central está conservada en todos os demais [[encima de restrición|encimas de restrición]] de tipo II. Tamén ten un subdominio de dimerización N-terminal formado por unha curta hélice α, unha folla de dúas cadeas [[antiparalelismo (bioquímica)|antiparalelas]], e unha longa hélice α. Este subdominio atópase só nos encimas EcoRV e [[PvuII]]. <ref name="Pingoud_&_Jeltsch_2001"/>
 
== Modo de acción ==
 
Igual que [[EcoRI]], EcoRV forma un [[homodímero]] en solución antes de unirse e actuar sobre a súa [[secuencia de recoñecemento]]. <ref name=Bitinaite_et_al_2001>{{Cita publicación periódica |author=Bitinaite J, Wah D A, Aggarwal A K, Schildkraut I |title=FokI dimerization is required for DNA cleavage |journal=Proc Natl Acad Sci USA |volume=95 |issue=18 |pages=10570–10575 |year=1998|pmid=9724744 |doi=10.1073/pnas.95.18.10570 |pmc=27935}}</ref> Inicialmente, o encima únese feblemente a un sitio non específico do ADN. Desprázase aleatoriamente ao longo da molécula de ADN ata que atopa o seu sitio de recoñecemento. <ref name="Pingoud_&_Jeltsch_2001"/> EcoRV ten unha alta especificidade pola súa secuencia diana no ADN.<ref name = Zahran>Zahran, M., Daidone, I., Smith, J. C., & Imhof, P. (2010). Mechanism of DNA recognition by the restriction enzyme EcoRV. Journal of molecular biology, 401(3), 415-432.</ref>
 
A unión do encima induce un cambio conformacional no ADN, que se curva uns 50°. A curvatura do ADN dá lugar a que as bases non queden ben situadas unhas enriba das outras, amplía o suco menor, e comprime o suco maior. Isto fai que o [[enlace fosfodiéster]] que vai ser cortado polo encima quede máis próximo ao [[centro activo]] do encima. A clivaxe ou corte ocorre dentro da secuencia de recoñecemento, e non require a [[hidrólise de ATP]].<ref name="Pingoud_&_Jeltsch_2001"/><ref name = Zahran/>
 
EcoRV é a única [[endonuiclease]] de restrición de tipo II que se coñece que causa un cambio conformacional importante no ADN. <ref name=Pingoud_&_Jeltsch_2001>{{Cita publicación periódica |author=Pingoud A, Jeltsch A |title=Structure and function of type II restriction endonucleases |journal=Nucleic Acids Research |volume=29 |issue=18 |pages=3705–3727 |year=2001 |pmid=11557805 |doi=10.1093/nar/29.18.3705 |pmc=55916}}</ref>
 
== Usos ==
393.002

edicións