Wikipedia

ELISA: Diferenzas entre revisións

Explorar o historial de forma interactiva
← Edición máis vellaEdición máis nova →
Contido eliminado Contido engadido
VisualTexto wiki
Miguelferig (conversa | contribucións)
241.928 edicións
Miguelferig (conversa | contribucións)
241.928 edicións
Liña 74:
 
=== ELISA competitivo ===
<!--
A third use of ELISA is through competitive binding. The steps for this ELISA are somewhat different from the first two examples:
 
Un terceiro modo deusar o ELISA é por medio de unión competitiva. Os pasos destes ELISA son algo diferentes dos dous primeiros métodos explicados, e consisten no seguinte:
# Unlabeled antibody is incubated in the presence of its antigen (sample).
# These bound antibody/antigen complexes are then added to an antigen-coated well.
# The plate is washed, so unbound antibodies are removed. (The more antigen in the sample, the more Ag-Ab complexes are formed and so there are less unbound antibodies available to bind to the antigen in the well, hence "competition".)
# The [[secondary antibody]], specific to the primary antibody, is added. This second antibody is coupled to the enzyme.
# A substrate is added, and remaining enzymes elicit a chromogenic or fluorescent signal.
# The reaction is stopped to prevent eventual saturation of the signal.
 
# Incúbase o anticorpo non marcado en presenza doseu antíxeno (mostra).
Some competitive ELISA kits include enzyme-linked antigen rather than enzyme-linked antibody. The labeled antigen competes for primary antibody binding sites with the sample antigen (unlabeled). The less antigen in the sample, the more labeled antigen is retained in the well and the stronger the signal.
# Despois engádense estes complexos antíxeno/anticorpo unido a un pozo cuberto de antíxeno.
# Lávase a placa para eliminar os anticorpos non unidos. (Cantomáis antíxenohaxa na mostra, máis complexos antíxeno-anticorpo se formarán e así haimenos anticorpos unidos dispoñibles para unirse ao antíxeno nopozo de reacción, de aí que se produza "competición").
# Engádese o [[nticorfpo secundario]], específico do anticorpoprimario. Este segundo anticorpo está acoplado ao encima.
# Engádese un substrato, e os encimas que permanecen orixinan un sinal cromoxénico ou fluorescente.
# Detense a reacción para impedir unha saturación do sinal.
 
Algúns ''kits'' de ELISA competitivo inclúen antíxenos ligados a encima en troques de anticorpos ligados a encima. O antíxeno marcado compite polos sitios de unión do anticorpo primario cos antíxenos da mostra (non marcados). Cantomenos antíxeno haxa na mostra, máis antíxeno marcado se retén no pozo e máis forte é o sinal.
Commonly, the antigen is not first positioned in the well.
 
Normalmente, non se coloca primeiro o antíxeno no pozo.
For the detection of HIV antibodies, the wells of microtiter plate are coated with the HIV antigen. Two specific antibodies are used, one conjugated with enzyme and the other present in serum (if serum is positive for the antibody). Cumulative competition occurs between the two antibodies for the same antigen, causing a stronger signal to be seen. Sera to be tested are added to these wells and incubated at 37&nbsp;°C, and then washed. If antibodies are present, the antigen-antibody reaction occurs. No antigen is left for the enzyme-labelled specific HIV antibodies. These antibodies remain free upon addition and are washed off during washing. Substrate is added, but there is no enzyme to act on it, so positive result shows no color change.
 
-->
Para a detección de anticorpos contra o VIH, recóbrense os pozos da placa microtitradora co antíxeno de VIH. Utilízanse dous anticorpos específicos, un conxugado co encima e ooutro presente no soro (se o soro é positivopara o anticorpo). Ten lugar unha competición acumulativa entre os dous anticorpos polo mesmo antíxeno, o que fai que se vexa un sinal máis forte. Engádense os soros que teñen que ser coprobados a estes pozos e incúbanse a 37&nbsp;°C, e despois lávanse. Seos están presentes os anticorpos, ocorre a reacción antíxeno-anticorpo. Non queda antíxeno para os anticorpos de VIH específicos marcados co encima. Estes anticorpos permanecen libres despois da súa adición e son retirados polo lavado. Engádese o substrato, pero este non ten encima que actúe sonre el, polo que un resultado positivo non mostra cambiode cor.
 
== Aplicacións ==
Traído desde «https://gl.wikipedia.org/wiki/ELISA»