Southern blot: Diferenzas entre revisións
Contido eliminado Contido engadido
Liña 26:
# Sitúase unha lámina de membrana de [[nitrocelulosa]] (ou, alternativamente de [[nailon]]) na parte superior do xel (ou debaixo dependendo da dirección da transferencia). Aplícase uniformemente presión ao xel (usando succión ou situando unha morea de toallas de papel cun peso encima da membrana e o xel), para asegurar un contacto bo e uniforme entre o xel e a membrana. Se se fai a transferencia por succión, úsase o tampón [[tampón SSC|20X SSC]] para asegurar o selado e impedir o secado do xel. Despois úsase o tampón para transferir por [[capilaridade]] desde a rexión de alto [[potencial hídrico]] á rexión de baixo potencial hídrico (xeralmente tecidos de papel e papel de filtro) para transferir o ADN desde o xel á membrana. O ADN únese á membrana por interaccións de [[intercambio iónico]] debido á carga negativa do ADN e a positiva da membrna.
# A membrana é entón quentada ao baleiro nun forno de baleiro ou normal a 80 °C durante 2 horas (en condicións estándar, con nitrocelulosa ou membrana de nailon) ou é exposta a [[radiación ultravioleta]] (con membrana de nailon) para que o ADN transferido quede unido permanentemente á membrana.
# A membrana é despois exposta a unha sonda de hibridación, que é un fragmento de ADN monocatenario cunha secuencia específica cuxa presenza no ADN diana debe determinarse. A sonda de ADN está etiquetada para que poida detectarse, xeralmente incorporándolle marcaxe [[radioactividade|radioactiva]] ou [[fluorescencia|fluorescente]] ou unha [[hibridación in situ cromoxénica|tinguidura cromoxénica]]. Nalgúns casos, a sonda de hibridación pode ser de ARN en vez de ADN. Para segurar a especificidade da unión da sonda
# Despois da hibridación, lávase o exceso de sonda da membrana (normalmente usando [[tampón SSC]]), e o patrón de hibridación visualízase cunha película de [[raios X]] por [[autorradiografía]] no caso de sondas radioactivas ou fluorescentes, ou pola aparición de color
== Resultados ==
| |||